CRISPR sgRNA文庫合成
研究基因在代謝通路或某些特定疾病發生過程中的功能，對于疾病機理研究及藥物研發具有非常重要的意義。新一代基因編輯技術CRISPR以其操作簡單和通用的獨特優勢，成為開展正向遺傳學篩選實驗強有力的工具。利用CRISPR技術建立可能與某類功能相關的突變體庫，通過功能性篩選和富集、PCR擴增及深度測序分析，確認與這類功能相關的基因。
泓迅科技利用獨創的“GPS”（Genotype，Phenotype，Synotype）平臺，提供基于CRISPR sgRNA文庫的一站式基因功能篩選服務。我們專利的Syno?合成技術平臺，可以快速高效地實現sgRNA文庫構建，并包裝成慢病毒混合文庫后轉染細胞。結合高通量/高內涵篩選平臺，利用控制細胞存活、結合免疫染色、流式細胞術等手段篩選得到所需細胞，最終通過測序等方法推斷出發揮作用的靶基因。
CRISPR sgRNA文庫合成技術路線圖
CRISPR基因編輯平臺一體化服務流程
泓迅CRISPR sgRNA文庫構建服務優勢
- 豐富的全基因組sgRNA設計經驗，覆蓋幾十種模式物種，亦可針對客戶需求的模式物種進行sgRNA設計。
- 根據客戶自身需求選擇sgRNA表達載體，并提供轉染級質粒。
- 行業內領先的QC指標。
- 提供從sgRNA設計、文庫構建到慢病毒包裝的一站式服務。
CRISPR sgRNA文庫合成和構建服務
泓迅科技CRISPR一站式基因編輯服務包括sgRNA序列設計、文庫構建、NGS驗證、慢病毒包裝等，為客戶提供基因功能篩選全套解決方案。
| 服務項目 | 服務詳情 | 周期 |
|---|---|---|
| sgRNA設計 | 針對特定基因分類進行gRNA序列設計 每個基因設計3-6條sgRNA |
1-2周 |
| 芯片合成 | 將所設計的所有sgRNA及陰性對照合成在一張芯片上 | 3-4周 |
| sgRNA文庫構建 | 將sgRNA構建到客戶的目標載體上 | 2-3周 |
| 文庫質粒大抽 | 根據發貨量進行轉染級質粒抽提 | 1周 |
| 文庫質檢及NGS驗證(可選) |
|
2-3周 |
| 病毒包裝(可選) | 慢病毒包裝，病毒滴度: 108TU/ml | 2-3周 |
| 總計 | 11-16周 |
CRISPR sgRNA文庫構建與篩選應用實例
【經典案例】已知藥物功能篩選其耐藥靶點的方案：
- 明確該藥物功能及其致死工作濃度。
- 構建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文庫并侵染細胞，構建整合CRISPR-Cas9 gRNA的細胞混合克隆。
- 篩選：高濃度藥物短期內持續作用細胞混合克隆，成活的細胞即為產生耐藥性的細胞，其耐藥性的產生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA導致的基因改變。
- 存活的細胞通過二代測序，比對得到gRNA 信息，從而推斷出起作用的基因靶點。
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